哈嘍哈嘍小編又來了，上期在《高效液相色譜日常維護要點-脫氣》中具體給大家介紹了為什么需要脫氣的具體原因和脫氣一些常規(guī)方法，那么今天就帶大家具體了解下高效液相色譜bi不可少的步驟—過濾。

任何顆粒物進入HPLC系統(tǒng)后都會在柱子入口端被篩板擋住，最后的結果是將柱子堵塞，一般表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形，從而導致檢測不能正常進行。因此，要采取各種預防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設計，努力防止或減少顆粒物進入HPLC系統(tǒng)中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，并提高數(shù)據(jù)的可靠性。

小編做了簡單總結，一般在HPLC系統(tǒng)中，顆粒物的主要來源有三個途徑：被測樣品、流動相和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。

液相系統(tǒng)中的第一類顆粒物來源是被測樣品。有過實驗經驗的小伙伴都知道，在將樣品上機之前，所有樣品都先通過一個0.45μm針筒式過濾器過濾。這是一個有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個過程也有一點美中不足就是：在使用針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會有或多或少的丟失。

液相系統(tǒng)中的第二類顆粒物來源是流動相。如果HPLC系統(tǒng)中存在顆粒雜質，那么系統(tǒng)中的幾個部件都不可以良好地運行。這些部件包括比例閥、止回閥、管路和色譜柱的濾頭。由于這個原因，使用沒有顆粒雜質的流動相非常重要。如果不是使用HPLC級別的溶劑作為流動相。那么流動相的組成成分必須在加入儲液瓶之前經過過濾。對于那些受監(jiān)管的工作環(huán)境，應該有一份標準操作程序(SOP)的書寫文檔，說明什么時候有必要對流動相進行額外過濾，什么時候不必要。

使用預先過濾過的溶劑是避免雜質顆粒進入流動相的zui簡單的方法。市場上銷售的HPLC級別的溶劑在包裝前預先經過亞微粒(通常為0.2μm)過濾器過濾。實驗室里(比如Milli-Q水凈化處理)準備的HPLC級別的水最后一步要通過0.2μm的過濾器過濾。如果在流動相里只用HPLC級別的液體，一般共識的就是不需要在使用之前操作任何額外的過濾程序。然而，假如使用的是非HPLC級別的試劑或者在流動相里加入了任何固體的試劑(比如磷酸鹽緩沖劑)，那么最明智的做法就是在使用之前過濾所有的流動相混合物。

流動相可以很容易地通過流動相真空抽濾裝置來過濾。一般步驟是首先將微孔濾膜(通常孔徑0.5μm)放置在漏斗和真空燒瓶之間的支撐濾頭上。然后把溶劑倒入漏斗然后在真空泵的協(xié)助之下，收集(過濾后的)溶劑。抽濾器生產商為不同的過濾應用提供了合適的過濾器材料的選擇指導。比如，PTFE微孔濾膜具有疏水性，適用于純有機溶劑，比如甲醇或者乙腈，但因為非極性很強因此不適用于快速過濾水。真空燒瓶之間的密封材料是用磨砂玻璃制成的，或者是一種“惰性"的瓶塞(比如硅酮)，但是最好還是不要讓流動相和瓶塞接觸。

最后，在HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一類主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉軸的磨損。關于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。

第一種建議認為：在一般實驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊。

第二種建議認為：原裝密封墊的密封xiao果最好，更換以后容易引起流動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。

到此為什么需要過濾的具體原因和日常過濾的具體方法，在這里就差不多介紹完了。下期小編將繼續(xù)帶領大家去具體了解高效液相色譜日常維護要點—沖洗。