洗脫原理主要是極性相似相容和親水分離分配模式，洗脫時極性強的溶劑越多，保留時間越短；出峰順序是極性弱的先出，極性強的后出，與反相相反，因此適合保留極性強，在反相上無法保留的物質(zhì)。

CTP、ATP、GTP、UTP的分離：

ATP：三磷酸腺苷

GTP：三磷酸鳥苷

CTP：胞嘧啶核苷三磷酸

UTP：三磷酸尿苷 

分析：各峰分離良好，但出峰均在純鹽相段出峰，保留弱，部分目標(biāo)峰的峰型不好，方法重現(xiàn)性不好，易與溶劑峰重合。

分析:  四種物質(zhì)分離*，保留適中，但有雜質(zhì)峰干擾風(fēng)險，峰形有可以優(yōu)化的空間，減少水相，延長保留。

分析：分離良好，峰形改善，雜質(zhì)無干擾，各目標(biāo)峰保留增強很多，一針運行時間較長，流動相中水相比例對保留與分離影響較大，與HILIC的分離原理符合，水相為強洗脫能力項，微小比例的改變對色譜效果影響大，水相比例減小。

分析：與預(yù)期相一致，保留時間縮短，與雜質(zhì)能較好分離，可以嘗試梯度，在HILIC模式中水相的微小變化對色譜圖影響大，因此兩針之間的平衡時間建議在10倍柱體積以上，而且平衡時間一致，也可以讓系統(tǒng)達(dá)到一個動態(tài)平衡，以保證分離效果的重現(xiàn)。

運行HILIC模式時：

1. 考慮樣品極性和溶解性：首先目標(biāo)一般是強極性物質(zhì)，且最好是在高比例有機相中有一定溶解性，如果樣品在有機相中不溶或溶解度很低，或容易產(chǎn)生其他反應(yīng)的，則不適用；

2. 考慮緩沖鹽與有機相的互溶性：調(diào)節(jié)流動相比例時，如果流動相中含鹽，要考慮鹽在有機相中的溶解度，避免出現(xiàn)鹽析等現(xiàn)象；

3. 關(guān)注系統(tǒng)真正的平衡狀態(tài)：系統(tǒng)平衡不僅僅是關(guān)注基線噪音和漂移的問題，是連續(xù)進(jìn)樣獲得穩(wěn)定的保留時間和峰面積，測試過程中會碰到系統(tǒng)平衡慢的問題，需要附上解決或改善方法；

4. 關(guān)注樣品的穩(wěn)定性：確保所使用的樣品溶液是zui接近初始狀態(tài)的，測試過程中需關(guān)注溶液穩(wěn)定狀態(tài)，必要時臨用新制；根據(jù)整個方法時樣品的主峰情況確定最終的配制方法和保存方法。